ColorQuest XT全自動(dòng)比色計(jì)采用的比色法(colorimetry)是生化檢測(cè)中很常用的方法,以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ),通過(guò)比較或測(cè)量有色物質(zhì)溶液顏色深度來(lái)確定待測(cè)組分含量。早在公元初古希臘人就曾用五倍子溶液測(cè)定醋中的鐵。1795年,外人也用五倍子的酒精溶液測(cè)定礦泉水中的鐵。但是,比色法作為一種定量分析的方法,大約開(kāi)始于19世紀(jì)30~40年代。
ColorQuest XT全自動(dòng)比色計(jì)的的原理
比色法的理論依據(jù)是物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系,光是一種電磁波,自然是由不同波長(zhǎng)(400~700nm)的電磁波按一定比例組成的}昆合光,通過(guò)棱鏡可分解成紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等各種顏色相連續(xù)的可見(jiàn)光譜。如把兩種光以適當(dāng)比例混合而產(chǎn)生白光感覺(jué)時(shí),則這兩種光的顏色互為補(bǔ)色。當(dāng)白光通過(guò)溶液時(shí),如果溶液對(duì)各種波長(zhǎng)的光都不吸收,溶液就沒(méi)有顏色。如果溶液吸收了其中一部分波長(zhǎng)的光,則溶液就呈現(xiàn)透過(guò)溶液后剩余部分光的顏色。例如,我們看到KMnO4溶液在白光下呈紫色,就是因?yàn)榘坠馔高^(guò)溶液時(shí),綠色光大部分被吸收,而紫色光透過(guò)溶液。同理,CuSO4溶液能吸收黃色光,所以溶液呈藍(lán)色。由此可見(jiàn),有色溶液的顏色是被吸收光顏色的補(bǔ)色。吸收越多,則補(bǔ)色的顏色越深。比較溶液顏色的深度,實(shí)質(zhì)上就是比較溶液對(duì)它所吸收光的吸收程度。
朗伯-比爾定律(Beer-Lambert Law),又稱比爾定律、比耳定律、布格-朗伯-比爾定律,是光吸收的基本定律,適用于所有的電磁輻射和所有的吸光物質(zhì),包括氣體、固體、液體、分子、原子和離子。比爾-朗伯定律是吸光光度法、比色分析法和光電比色法的定量基礎(chǔ)。光被吸收的量正比于光程中產(chǎn)生光吸收的分子數(shù)目 。
物理意義是當(dāng)一束平行單色光垂直通過(guò)某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí),其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度b成正比,而透光度T與c、b成反比。
比爾-朗伯定律數(shù)學(xué)表達(dá)式
A=lg(1/T)=Kbc
A為吸光度,T為透射比(透光度),是出射光強(qiáng)度(I)比入射光強(qiáng)度(I0).
K為摩爾吸收系數(shù).它與吸收物質(zhì)的性質(zhì)及入射光的波長(zhǎng)λ有關(guān).
c為吸光物質(zhì)的濃度,b為吸收層厚度.【b也常用L替換,含義一致】